摘 要:本文简要说明了菌种培养基的分类,从消毒、灭菌、菌种制作、菌种培养、菌种污染原因分析上进行了论述,并对菌种老化与退化标准,菌种质量标准,菌种质量鉴别标准上进行了论述,给菌种质量判别提供了依据。
关键词:食用菌;菌种;培养基;菌种制作
中图分类号:S646 文献标识码:A DOI:10.11974/nyyjs.20171232009
1 菌种的级别划分
1.1 母种
母种又称一级种,试管种,是食用菌的原始出发菌株。母种的来源:通过组织分离法或孢子分离法自己选育而成;向有信誉的科研单位购买(引种必须作出菇试验,验证考核后方能用于大面积生产)。母种转接一般以1支母种可转10~20支,在25℃培养,6~22d长满(因品种而异),母种必须纯度高,活力强。
1.2 原种
原种又称二级种。是由母种扩繁而来。一般1支母种可转接5~6瓶,25℃培养30d左右长满。原种要求必须纯度高,活力强,营养丰富。
1.3 生产种
生产种又称三级种,栽培种。是由原种扩繁而来,直接用于生产的菌种[1]。一般一瓶原种可转接50~60瓶。25℃下培养20~30d能长满瓶。一级菌种培养基配方(适用于平菇、香菇、金针菇、木耳、滑菇等大多数食用菌):土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁2g、维生素B1或B2 6片、水1000mL。
1.4 二、三級种配方
粉碎玉米芯70%、玉米面30%,另外加石膏1%、白灰2%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.2%、多菌灵0.1%。
1.5 粮食菌种制作
选用干净无霉变小麦粒或玉米粒、高粱粒,用清水浸泡12h以上,捞出用水煮,煮至熟而不烂、不开花为准,捞出控干水分,加入石膏粉2%~3%,有条件加入30%木屑拌匀,装点滴瓶较好。优点:菌丝生长健壮有力,可最大限度提高产量,生长速度较常规配方缩短50%以上时间。缺点:制作较繁琐,容易污染。
2 培养基种类
2.1 培养基具备的3个条件
含有该菌生长所需的营养、水分、适宜的酸碱度;具有一定的生长反应;严格灭菌,保持无菌状态。
2.2 培养基按原料来源划分
天然培养基;合成培养基;半合成培养基。
2.3 按物理状态分
固体培养基;液体培养基。
2.4 按使用目的分
斜面琼脂培养基;平板培养基。
2.5 按使用用途分
基础培养基(如PDA);加富培养基,又称富集培养基;选择培养基;鉴别培养基。
3 消毒与灭菌
3.1 消毒灭菌
通过物理、化学或生物手段来杀灭或清除全部或部分微生物,使之不再危害食用菌生长,达到预期生产的目的。消毒是杀灭病原微生物,而灭菌则是杀死全部微生物,包括细菌芽孢。消毒是不彻底的灭菌,灭菌是彻底的消毒。
3.2 常压灭菌优点
投资少、设备简单,可大面积处理灭菌物品。由于温度仅100℃左右,培养基成分不会受到太多破坏。常压灭菌缺点:时间长,瓶装100℃、6~8h,小袋10~12h,大袋14h以上,耗费大量能源。搭建要求:常压灭菌锅搭建要科学,防小锅大灶、前后锅,要留排气孔,留加水管。常压灭菌锅使用时要注意:“攻头、保尾、控中间”。中途补水要及时,且要用热水,以防中途降温,影响灭菌效果。
3.3 高压灭菌优点
温度高、压力大,短时间可杀灭杂菌,灭菌彻底。高压灭菌缺点:设备投资大,由于温度高,培养基的营养成分会不同程度受到破坏。使用高压灭菌锅注意事项:一定要排冷空气,否则造成假压,灭菌不彻底。要检查仪器、仪表,不要失灵。使用时要注意安全,不能自制。
3.4 接种箱或接种室消毒
3.4.1 过氧乙酸
是比较高效的杀菌剂,杀菌谱广,并且杀菌迅速彻底。分解物无毒无味,对人体无任何不良反应。使用量为每立方米14mL,加入8mL乙醇熏蒸接种箱,1h后即可接种。接种室6~8h即可。过氧乙酸容易失效,需置低温避光处保存。
3.4.2 气雾消毒盒
也可用于接种箱、接种室消毒3g/m3,点燃产生烟雾剂气体,烟雾散尽即可接种。
3.4.3 紫外线灯消毒
对细菌效果较好,对真菌较差。由于其穿透能力差,为消毒的辅助手段,而非主要手段。其杀菌强度与照射距离有关,其有效距离2m以内,最佳1.2m以内。还与照射时间长短有关。时间越长,效果越好。2h以上也可杀灭真菌。一般照射1h,使用紫外线应避免人肉眼直接接触,否则会造成电光性眼炎,可用人奶治疗。
3.4.4 多菌灵
是一种高效广谱内吸性杀菌药。杀菌范围广,对大部分真菌有效。对毛霉、根霉效果差,对细菌几乎无效。
4 菌种制作的具体方法
4.1 组织分离法
利用菇体组织来获取纯菌种的方法。其特点:取材广泛,简单易行;属无性繁殖,能保持原种性的特征,不易发生变异;由于子实体菌龄最长,故用此法取得的菌种菌丝长势、出菇产量不及孢子分离法。
4.2 孢子分离法
利用成熟的子实体释放孢子,孢子萌发出单核菌丝,2条性别不同的单核交配,结合成新个体,获得纯菌种的方法。特点:孢子数量大,可供人们选育优良菌种的机会大大增加;孢子分离