水产品是人们生活中的重要食物来源,它的安全问题备受关注,其兽药残留问题更是敏感,目前已有多种快检技术应用于水产品兽药残留领域的检测。本文主要概述了化学比色法、酶联免疫法、胶体金免疫层析法和量子点荧光免疫分析法等多种快检技术在水产品兽药残留检测方面的研究进展。
我国是世界上水产品产量最大的国家之一,作为餐桌上的佳肴,伴随水产品需求量的不断增长,安全问题也日趋严峻。水产品的安全风险主要来源于水体中的消毒剂、重金属及饲料中的农药和兽药残留,其中,兽药残留问题较为突出。为避免水产品安全事故的发生,有效的兽药残留检测技术必不可少。
快速检测技术
目前,常规的检测方法多为仪器分析法,其灵敏度和准确度都比较高,但存在费用高、检测周期长等问题,无法满足现场快速检测的需求,因此,简单快速的检测技术具有广阔的应用前景。本文对化学比色法、酶联免疫法、胶体金免疫层析法和量子点荧光免疫分析法等多种快检技术在水产品兽药残留检测方面的研究进展作一综述。
放射免疫测定法
1959年,Yelow等建立了放射免疫测定法(RIA),其基本原理是标记抗原和非标记抗原对专一抗体的竞争抑制作用,利用了放射性示踪的灵敏度和抗原-抗体反应的特异性。李佐卿等利用放射免疫法来检测鱼肉和鸡肉中磺胺类药物的残留量,其中对鱼肉样品加标10μg/kg进行了18次测定,精密度为5.4%,测定低限能达到10μg/kg。陈键等研究了放射免疫法检测鳗鱼中磺胺类药物残留,验证了磺胺类药物在最大残留限量50μg/kg时的检测稳定性,并且90min即可得到检测结果。陈小雪等采用放射免疫法对水产品中氯霉素残留进行了分析,检测低限为0.15μg/kg。郑晶等利用放射免疫法快速筛检烤鳗中四环素类药物残留,检测限为50μg/kg。目前,放射免疫测定法以其高灵敏度已被广泛应用于多个领域。
酶联免疫吸附法
1971年,瑞典学者Engvail和Perlman与荷兰学者Van Weerman和Schuurs几乎同时建立了检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,即酶联免疫法(ELISA),其基本原理是酶与抗体或抗抗体共价结合,形成酶标记复合物,再与相应的抗原形成酶标记的抗原抗体复合物,然后相应的底物在酶的催化下反应生成另一种有色产物。
周大勇建立了诺氟沙星的竞争性酶联免疫吸附测定法,其检测范围为10~500ng/mL,最小检测浓度为4.6ng/mL。同时,周大勇测定了9种诺氟沙星类似物和一些抗菌素的交叉反应率,其中洛美沙星的交叉反应率最高,达到了64.18%,其余8种类似物的交叉反应率均小于10%。采用这种方法测定草鱼鱼肉中的诺氟沙星含量,回收率为82.06%。李雅丽建立了基于多克隆抗体的间接ELISA方法来检测喹诺酮,该法可用于猪肉和鱼肉组织中19种喹诺酮类药物的检测,效果良好。
Umaporn等利用ELISA法测定虾中5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)的残留,检出限为0.16μg/ kg。Jester Edward等使用R-Biopharm公司生产的ELISA试剂盒检测了鱼肉样品中的硝基呋喃药物残留,与使用LC-MS-MS检测的结果吻合度较高。李亚楠等建立了测定呋喃妥因代谢物的直接竞争酶联免疫法,线性检测范围为0.177~11.508ng/mL,其中鱼肉的最低检测限为0.109μg/kg。
郑晶利用酶联免疫法来测定鳗鱼中恩诺沙星的残留量,当样品浓度为0.3~ 10μg/kg时,最低检测限为3μg/kg;当样品浓度增加至25~100μg/kg时,回收率为66.5%~76.6%,灵敏度为0.3μg/kg。刘晓红等利用酶联免疫法测定鲤鱼中恩诺/环丙沙星的残留量,当浓度为10~810mg/kg时,最低检测限为10μg/kg;当样品添加浓度为20~500μg/kg时,回收率为76.6%~80.9%。李宗妍等建立了一步法酶联免疫法测定水产品中恩诺沙星的残留,检测限为10μg/kg,在10~40μg/kg浓度范围内,检测回收率可达70%以上,检测时间缩短至2h以内。冯婷婷等利用抗恩诺沙星单克隆抗体建立了酶联免疫吸附法用来检测动物源性食品中恩诺沙星的残留,检测范围为0.5~50μg/L,最低检测限为0.2μg/L,在鸡肉、鱼肉、虾和蜂蜜样品中的回收率为93.3%~122.7%。
酶联免疫吸附法的特异性强,且简便快速,在水产品兽药残留快速检测方面应用广泛,许多公司已具有商品化产品。酶联免疫吸附法作为目前研究较为成熟的快检方法,在市场上占有较大份额。
胶体金免疫层析法
1971年,Faulk和Taylor首次将胶体金应用于免疫分析。此后,Osikowicz和Beggs等将胶体金免疫层析技术应用于人类绒毛腺激素的定性检测中,其基本原理是以胶体金(红色)作为示踪标记物,让其与蛋白质等多种大分子物质结合,再利用抗原抗体反应达到检测目的。
韩静等首次建立了同时检测猪肉、鸡肉、鲫鱼中磺胺异噁唑、磺胺噻唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺氯哒嗪的多残留免疫胶体金试纸条检测方法,视觉检测限为0.01mg/kg,检测时间小于10min。冯婷婷等建立了同时检测11种喹诺酮类药物的胶体金免疫层析方法,对猪肉和虾中恩诺沙星、环丙沙星和氧氟沙星的检测限均为30ng/g,整个检测过程(包括样品前处理)可在20 min内完成。吴茂生等利用胶体金免疫层